抗体亲和力能够解释抗体与抗原结合能力的强弱。在体液免疫中，再次应答所产生抗体的平均亲和力高于初次免疫应答，这种现象称为抗体亲和力成熟。这是由于抗体形成细胞本身的基因突变和抗原对B细胞克隆的选择性激活。抗体亲和力成熟是长期进化和对外界环境不断适应的结果，对机体防御和维持自身免疫监控意义重大。

基于杂交瘤细胞或构建体外抗体库来研发药用抗体是常用的方法。通过抗体筛选可以初步获得阳性hits，而要得到药用价值的抗体还需要多重功能验证。常规抗体一般都要经过亲和力、免疫原性、抗衰期等多个指标的优化。抗体亲和力成熟的过程是在原来的亲本抗体基础上，经过改进得到的一些特性方面更好的成熟抗体。

主要技术方法

1.模拟体细胞高频突变

BCR基因重排后的成熟Bcell受到抗原刺激后，会在生发中心发生重链和经链V区的高频率突变（点突变为主），FDC捕状抗原使表达高亲和力抗体的Bcell的免于死亡。

2.基于抗体库的亲和力成熟策略

2.1建库策略

建库的策略可分为两个大的类别：一类是构建较大的库，将抗体CDR区域甚至路个V区做随机突变；另一类是构建较小的库，将突变集中于抗体序列上特定的区域。

大库构建主要是CDR walking、chain shuffling、DNA shuffling等。相比大库的构建，小库构建更有序列针对性。在没有具他信息的情况下，人们习惯优先选择对抗体重链CDR3区域进行随机突变，因为重链CDR3区城被认为通常对抗原抗体结合起关键作用。

（1）基于抗原抗体复合物的结构信息的突变区域选择

当抗体抗原复合物的结构被解析之后，我们就可以得知两者相互作用的位点信息，进而进行更精确的突变和建库。

（2）基于胚系基因热点的突变区域选择

胚系基因热点是体细胞高频突变过程中的优先突变区域，几乎都处于CDR区域内部，该区域对抗体的亲和力提高有关键作用，因此体外亲和力成熟时可优先考虑抗体的 胚系基因热点。具体的做法是利用数据库来比对抗体的序列和抗体胚系基因序列，结合序列相似度和RGYW motifs等坐标性的序列预测出胚系基因热点，然后在这些热点位置进行突变，构建小的库进行筛选。

具体技术

根据抗体亲合力成熟的原理，在体外抗体亲和力成熟的过程中，选择突变区域以及如何引入突变是一个关键问题，目前突变策略主要分三类：随机突变，随机突变，置换和定向突变。

（1）错配PCR：

错配PCR是目前常用的抗体突变技术，可以在抗体基因的全场或部分区域翩机引入突变，在聚合解对目的基因扩增时；通过调整反应条件以及使用错错配率高的聚合酶等，以一定的频率向目的基因中随机引入突变，经过PCR反复进行进行随机诱变，需计突变效应，最终获得目的蛋白的随机蛋白突变体。

（2）DNA改组

DNA改组技术是对同源的抗体基因，采用脱氧核糖核甘酸酶1将其切剂成不超过50bp的片段，再随机组合后进行PCR扩增成完整的抗体基因的技术，包合了抗体片段随机化切割重组和筛选的过程，一定程度上模拟了天然抗体亲和力成熟的过程，并加快了体外定向进化速度。

（3）链置换

保留某个特定抗体的轻链或重链，另一条链与一个随机化的互补链进行组合，从中筛选更高活性的突变株。通过固定抗体两条链中的一条链，对另一条链构建具有足够多样性的置换文库。随机组合有可期产生最佳链组合，通过噬菌体抗体库选可获得高亲和力的抗体。

（4）定点突变

由于天然抗体在亲和力成熟过程中，体细胞高频突变发生区域并非均匀分布，而是主要集中在与抗原直接接触的CDR区。在抗体的亲和力体外成熟过程中，CDR去是最常选用的定点突变区域，这样既可以获得足够的多样性，又不会破坏蛋白质结构，对CDR进行定点突变时，可以对多个CDR进行平行突变或者逐步进行优化。